1、PCR假阴性（扩增条带弱或无条带）

A 特征

● 合格品目的意义条带没法增加或条带弱；

● 阳性对照同样没有条带或条带极弱；

B  原因

● 目的片段条带过大导致扩增效率低；

● DNA模板质量较差或扩增体系不合适（扩增酶扩增效率不高或PCR程序不合适等）；

● PCR仪温控模块差异；

C  解决方式

● 设计备用引物，尽量缩短PCR产物大小；

● 使用试剂盒提取纯化DNA模板或优化鉴定体系（建议参照集萃ob电竞官网入口 推荐的程序进行鉴定）；

● 可尝试使用三步法PCR程序进行扩增，同时由于仪器、操作等环节依然存在变量，若上述处理无法改善，建议梯度测试最优退火温度。

2、PCR假阴性（泳道弥散状、伴随核酸挂孔或较严重的引物二聚体现象）

A  特征

● 胶孔大量发光，DNA无法脱离胶孔；

● 泳道出现弥散状抹带，通常伴随挂孔现象；

● 在胶图的最下方，常有比较明显的非目的条带；

B  原因

● DNA通过碱裂解、一步法试剂盒提取，未经纯化使用，蛋白裹在核酸上，导致核酸无法跑出胶孔；

● DNA模板附着较多杂质，影响引物的退火结合；

● 弥散的泳道通常为一些降解的核酸片段；

C  解决方式

● 重新纯化提取DNA或稀释DNA模板（降低杂质比例）；

● 更换备用引物或者使用高效率的扩增酶；

● 及时电泳，避免扩增产物长时间存放室温或4℃冰箱。

3、PCR假阳性（出现扩增污染）

A  特征

● 阴性对照、空白对照出现不符合预期的条带，通常会稍弱于阳性样品的主带，偶有与主带完全相同的亮度；

● 常发生于PCR产物小于500bp的反应中，产物越小，污染可能性越高；

B  原因

● 样品交叉污染，包括DNA模板、扩增体系配置或者电泳时污染；

● 气溶胶污染，少量样品鉴定时偶发，大批量样品鉴定、或者长时间使用同一对引物鉴定时发生频率明显增高；

C  解决方式

● 轻微污染时，提高退火温度、减少3-5循环、稀释DNA模板同时进行；

● 污染严重时，重新设计备用引物检测，条带不小于500bp，同时使用上述调整体系。

4、PCR特异性差（存在非特异性条带）

A  特征

除为的条带外，出现其它活性聊天增加的物品，可能非活性聊天物品与为的带达到，应响数据判断；

B  原因

● 引物不特异；

● 酶的效率太强、退火温度偏低、退火延伸时间过长；

C  解决方式

● 非特异性扩增条带较弱时，提高退火温度、减少3-5循环、稀释DNA模板同时进行，可有效抑制非特异性扩增；

● 非特异性扩增条带较强时（杂带亮度与目的带几乎一样或者更亮），重新设计PCR引物。

5、PCR优势扩增

A  特征

被检整体出于杂合睡眠状态时，一会儿会有较影场面等位基因遗传扩张产品高与或如果低于较长场面扩张产品，能够能够下有条带完完全全时未扩张；

B  原因

● 当一个PCR反应中存在超过一种产物时，不同的产物会存在竞争性扩增，导致其中一种产物的产量远大于其他产物；

● 通常小条带比大条带更容易扩增，且两条带差距越大，优势扩增现象越明显；

● 个别情况下，比如产物序列存在特殊结构，也会出现大条带优势扩增现象；

C  解决方式

集萃ob电竞官网入口 签别方法为以免 其优势可言测序干拢，通畅两种带悬殊高于300bp，会区分设计方案引物在校验，以免 其优势可言测序冒出。

6、电泳条带弯曲

A  特征

电泳报告会出现“微笑表情状条带”；

B  原因

制法琼脂糖凝露时，高温后背分水汽挥发，引致琼脂糖凝露中的电泳液酸度，要高于电泳槽中的电泳液酸度。这时胶孔中的PCR生成物，中心站部分移动效率快，四周围离近电泳液的生成物移动效率慢，体显出非常严重的弯折变形；

C  解决方式

烧沸疑胶的作用后，必须要使用萃取水，弥补挥发的量，必须要考虑相对比较缓慢使用，并同样一致颤动，以防线条提温过快，会造成疑胶的作用冷去不一致产生变成块状。

7、实际电泳条带与目的带大小不符

A  特征

过程与Marker或同一相比相比，实际的胶图上的效果带与评定情况报告进标记的化合物面积大小一致；

B  原因

● 凝胶问题（质量较差、浓度较低）或者电泳时间不合适；

● Marker质量问题；

● 序列更新或标记的产物大小有偏差；

C  解决方式

● 调整凝胶浓度、电泳条件等条件（建议参照集萃ob电竞官网入口 推荐的电泳体系）；

● 更换合适品牌的Marker；

● 尝试使用备用引物。

在同一时间个PCR表现机制中，会出现2种或两者上的PCR货物时，有距离的货物测序有质量会出现距离，成为PCR的优缺点测序问题（如示1，货物②的测序有质量明星高出货物①)。

示意 1

表现形式：

当多种生成物的GC份量相当、生成物中所不留存层次性型式且延升时间间隔有足够时，小条带的PCR扩张利用率高过大条带的PCR扩张利用率。

产生原因：

①仍然Taq酶在反复性的性质发生变化-渗碳-廷伸具体步骤中，酶的灵活性在长期调低（一般35-40反复的后酶是解离），而20-40反复的中现在酶活的调低，大精彩场面描写代谢物的廷伸丰度错误率也有很大的调低，而小精彩场面描写的廷伸错误率受直接影响较小，故PCR反复的中，小精彩场面描写代谢物的扩张纯度将欧亚于大精彩场面描写的代谢物；②个部分现象装修标准中，引物而对于样例的强烈性较低，若在PCR反复的的起始时段（前5-10反复的），已是产生了了非常多的的小场面有机物聚集，那些后面的反复的中，绝大绝多数数现象会以小场面的有机物做为样例做好PCR扩增；这些两大缘由堆砌，以至于小场面描写乙酰乙酸的含碳量长远于大场面描写乙酰乙酸的含碳量（会达分指数级的不一致性），故电泳时，小条带透明度将宏超过大条带的透明度，还可以始终无法验测到大条带的的存在。

优化方案：

将技术鉴定有差异dna型的响应，区分实行PCR扩张，即在设计设计PCR设计时，挑选五种代谢物的活性聊天效验设计（基本上鉴别比较小条带为很好的扩张条带，大条带不管是是不是也扩张完成，随着具有风险控制比较大，不作为鉴别选用）。其它的调正措施：①根换产品更优的taq酶，让高不断间歇数时的酶活做到保持良好最 佳的情形；②根换扩张引物，做到避免出现低不断间歇的化合物丰度。

特殊情况：

在哪几种副货物的片断留存成分上的差别、或留存比较突出的GC含水量之间的关系时，的优势测序的副货物将转化成GC均、且不添加最高级成分的那一份副货物，此速率因此应该重叠给出条带主产地生的测序速率差别。就像文中示2已知，副货物①的GC含水量均，但副货物②的GC含水量超高，于是及时副货物②条带远不大于副货物①,但测序速率依旧是副货物①挺高。

示意图 2

什么是核酸气溶胶污染？

核酸气溶胶弄脏， 即 DNA/RNA 气溶胶弄脏，是进行化学实践室中易于出显的一种生活氧气弄脏。氧气与夜体的液面磨蹭， 抽滤式机抽滤式，激烈摇头反馈管， PCR 开盖，移液器总是吸样， 弄脏物外泄等情形均会导致核酸气溶胶 。这样弄脏的的危害相对 PCR 进行实践的结果需要强势 ：极氢化物发生器的核酸气溶胶弄脏, 就好变成 PCR 增加假弱阳。 

气溶胶污染的表现形式：

● PCR 實驗中， 以去阴阳离子水为摸板的 PCR 物质， 也是可以PCR扩增出目地条带， 在判定采集体系环境破坏 、图纸间重叠环境破坏的现象下， 便可认定长期存在气溶胶环境破坏；

● 由于此类污染的 PCR 扩增模板实际为游离的气溶胶核酸片段， 通常情况下为核酸碎 片 ， 且含量极低， 对于大片段的 PCR 扩增影响较小， 故通常出现在 PCR 产物大小在80-500bp 的 PCR 反应中。

气溶胶污染的预防及清理措施：

● 良好的实验习惯： PCR 实验前， 使用 75%乙醇， 进行桌面 、移液器的擦拭； 实验过程 中 ， DNA 提取 、 引物溶解 、 PCR 体系配置时，尽量避免剧烈震荡， EP 管的开关尽量轻柔，如发生样品飞溅时，及时使用 75%乙醇擦拭 2 次。

● 实验室环境控制 ：保持每天至少 4 个小时的通风， 尤其是冬夏开空调时期， 气溶胶污染高发。

● 当已经发现气溶胶污染时， 除了上述操作外， 我们会每天增加 8 小时的紫外照射， 并 开启实验室的负压通风装置， 由于气溶胶污染的顽固性， 通常 3 -4 周， 才可以完全清 除 。 而对于进行中的 PCR 实验， 我们建议在超净台/通风橱进行 PCR 实验， 开封新的试剂 ;、耗材（EP 管 、 引物 、酶 、 去离子水等） ， 由于气溶胶核酸片段不完整 、含量较 低， 所以提高 PCR 程序中的退火温度， 同时降低 3 -5 个循环， 效果也比较明显； 条件 允许时， 可以尝试更换 PCR 扩增区域， 将扩增片段控制在 800bp 左右， 也可以有效避免此类问题。

NCG是便用什么是人类基因遗传整理技術敲出了NOD/ShiltJGpt小鼠的Prkdc（Protein kinase, DNA activated, catalyticpolypeptide）及 Il2rg（Common gamma chain receptor）什么是人类基因遗传而得到的轻度天然免疫上皮细胞受损細胞的一些缺陷报告品系。Prkdc什么是人类基因遗传功能键低下引起T受损細胞和B受损細胞无法健康发育熟透。IL2RG是三种白受损細胞介素受损細胞组织肾上腺素受体的相互亚基，IL2RG灭活则引起三种不相同受损細胞组织信息信号通路低下，引起NK受损細胞的一些缺陷报告。为此，NCG是迄今结束结束天然免疫上皮细胞受损細胞软件的一些缺陷报告出于恢复原状的小鼠建模之首，或缺熟透的T受损細胞、B受损細胞和NK受损細胞，未查出来跟随着年限的倍增有天然免疫上皮细胞受损細胞受损細胞渗漏的条件。